用于化妆品微生物指标(菌落总数、霉菌和酵母总数、耐热大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌)检测;
本方案参照食品药品监督管理总局批准颁布的《化妆品安全技术规范》2015版和2022版征求意见稿、SN/T 2098-2008 《食品和化妆品中的菌落计数检测的新方法-螺旋平板法》。
2.1液体样品:用吸管手动吸取或用自动重量稀释仪自动称重稀释,均质器自动均质后制成1:10检样。按需进行梯度稀释。
2.2 油性液体样品:10g样品+5mL灭菌石蜡油混匀+10ML灭菌吐温80
(40℃-44℃水浴振荡10min)+75ML灭菌生理盐水(40℃-44℃预温),乳化后制成1:10的悬液。按需进行梯度稀释。
2.3.1 亲水性样品:10g样品+ 90ML灭菌生理盐水,均质1min—2min,静止取上清,上清为1:10匀液。按需进行梯度稀释。
2.3.2 疏水性样品:10g样品+10mL 灭菌液体石蜡+10mL 灭菌吐温 80+70mL 灭菌生理盐水,均质3min—5min,制成1:10 检液。按需进行梯度稀释。
2.3.3 固体样品:称取10g+90mL 灭菌生理盐水,均质3min—5min,充分均质混匀,静置后,取上清液作为1:10 的检液。
总结:化妆品根据与水分子的亲和性及性状的不同,具有不一样的类型,包括疏水性样品和亲水性样品以及液体样本和固体样本,有关标准规定不一样的样品取10g/10mL经过不同的前处理,形成1:10的检液。其中,亲水性样本一般选择生理盐水进行稀释,而油性液体样本或疏水性样本稀释液除生理盐水以外,还需添加一定体积的非离子型表面活性剂(如tuwen80)与液体石蜡混合用于样品的乳化过程,从而使微生物更均匀的分散,以便于其检出。此过程一般可通过重量稀释仪和均质器实现。
根据化妆品技术规范需要倾注法接种样品,但此法对操作人员的要求比较高,而涂布法操作难度低,可预先倒置相关微生物检测的培养基平板,用自动细菌涂布仪涂布接种,上样量可调至100微升。此外,根据SN/T 2098-2008 《食品和化妆品中的菌落计数检测的新方法-螺旋平板法》,化妆品中菌落计数还可选择螺旋接种法。
细菌用恒温培养箱培养,霉菌和酵母菌用霉菌培养箱,培养条件根据微生物种类的不同而不同。
微生物定量检测用全自动菌落计数仪实现菌落计数,如样品中菌落总数的测定、霉菌及酵母菌总数;微生物定性检测用自动微生物生化鉴定系统实现,如铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的定性。
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